Dimaksudkeun Paké
Hal ieu dipaké pikeun deteksi Monkeypox Virus dina sérum manusa atawa sampel exudate lesion ku ngagunakeun sistem PCR nyata waktu.
Prinsip Ujian
Produk ieu mangrupikeun sistem assay PCR dumasar-fluoresensi Taqman® sacara real-time.Primer sareng panyilidikan khusus dirancang pikeun ngadeteksi gén F3L tina Virus Monkeypox.Kontrol internal nargétkeun gén anu dilestarikan manusa ngawas koleksi sampel, penanganan sampel sareng prosés PCR sacara real-time pikeun nyingkahan hasil négatip-palsu.Kit mangrupikeun sistem lyophilized premix pinuh, anu kalebet bahan anu dipikabutuh pikeun deteksi Virus Monkeypox: énzim amplifikasi asam nukléat, énzim UDG, panyangga réaksi, primer khusus sareng usik.
Komponén | Bungkusan | bahan |
Virus MonkeypoxPremix Lyophilized | 8 tabung PCR strip× 6 kantong | Primer, probe, dNTP/dUTP Mix, Mg2+, Taq DNA polymerase, UDG Enzyme |
MPV Positip Control | 400 μL × 1 tabung | runtuyan DNA ngandung gén Target |
Kontrol négatif MPV | 400 μL × 1 tabung | Sekuen DNA anu ngandung ségmén gén manusa |
Ngabubarkeun Solusi | 1 ml × 1 pipah | Penstabil |
Sertipikat of Conformity | 1 sapotong | / |
1. SampelKoléksi:Spésimén kudu dikumpulkeun dina tabung steril saluyu
kalawan spésifikasi teknis baku.
2. Persiapan Réagen (Daérah Persiapan Réagen)
Candak kaluar komponén kit, kasaimbangan aranjeunna dina suhu kamar pikeun pamakéan sayaga.
3. Ngolah Spésimén (Daérah Ngolah Spésimén)
3.1 Ékstraksi asam nukléat
Disarankeun nyandak sampel cair 200μL, Kontrol Positip sareng Kontrol Négatip pikeun ékstraksi asam nukléat, numutkeun sarat sareng prosedur kit ékstraksi DNA virus.
3.2 bubuk Lyophilized ngabubarkeun jeung tambahan template
Nyiapkeun premix Monkeypox Virus Lyophilized nurutkeun jumlah sampel.Hiji sampel peryogi hiji tabung PCR anu ngandung bubuk premix Lyophilized.Kontrol négatip & kontrol positif kedah diperlakukeun salaku dua sampel.
(1) Tambahkeun 15μL Solusi Dissolving kana unggal tube PCR ngandung Lyophilized premix, lajeng nambahkeun 5μL sampel sasari / Control Négatip / Control positif kana unggal tube PCR mungguh.
(2) Panutup tabung PCR pageuh, sintreuk tabung PCR ku leungeun nepi ka bubuk lyophilized sagemblengna leyur na blended, kumpulkeun cairan ka handap tabung PCR ku sentrifugasi-speed low instan.
(3) Upami nganggo alat PCR Real-time umum pikeun deteksi, teras langsung mindahkeun tabung PCR ka daérah amplifikasi;lamun make BTK-8 pikeun deteksi, mangka kudu ngalakukeun operasi di handap ieu: mindahkeun 10 μL cairan tina tube PCR ka chip réaksi well of BTK-8.Hiji tabung PCR pakait sareng hiji sumur dina chip.Salila operasi pipetting, pastikeun pipette nyaeta 90 derajat nangtung.Tips pipette panghalang aerosol kudu ditempatkeun di tengah sumur kalawan gaya sedeng jeung ngeureunkeun ngadorong pipette nu lamun ngahontal gear munggaran (pikeun nyingkahan gelembung).Saatos sumur dieusian, cabut mémbran chip réaksi pikeun nutupan sadaya sumur sareng chip kasebut teras dialihkeun ka daérah deteksi amplifikasi.
4. Amplifikasi PCR (Area Detéksi)
4.1 Pasang tabung PCR / chip réaksi kana tank réaksi tur nyetel ngaran unggal réaksi ogé dina urutan pakait.
4.2 Setélan fluoresensi deteksi: (1) virus Monkeypox (FAM);(2) Kontrol internal (CY5).
4.3 Jalankeun protokol siklus di handap ieu
Protokol ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio:
Léngkah | Suhu | Waktos | Siklus | |
1 | Pra-denaturasi | 95 ℃ | 2 mnt | 1 |
2 | Denaturasi | 95 ℃ | 10 s | 45 |
Annealing, extension, akuisisi fluoresensi | 60 ℃ | 30 s |
Protokol BTK-8:
Léngkah | Suhu | Waktos | Siklus | |
1 | Pra-denaturasi | 95 ℃ | 2 mnt | 1 |
2 | Denaturasi | 95 ℃ | 5 s | 45 |
Annealing, extension, akuisisi fluoresensi | 60 ℃ | 14 s |
5. Analisis hasil (mangga tingal Manual Pamaké Instrumen)
Saatos réaksina, hasilna bakal disimpen sacara otomatis.Klik "Analisis" pikeun nganalisis, sareng alat bakal otomatis napsirkeun nilai Ct unggal sampel dina kolom hasil.Hasil kontrol négatip sareng positif kedah saluyu sareng "6. Kontrol Kualitas ".
6. Kontrol kualitas
6.1 Kontrol négatif: No Ct atanapi Ct> 40 dina saluran FAM, Ct≤40 dina saluran CY5 kalayan kurva amplifikasi normal.
6.2 Kontrol Positip: Ct≤35 dina saluran FAM kalayan kurva amplifikasi normal, Ct≤40 dina saluran CY5 kalayan kurva amplifikasi normal.
6.3 Hasilna sah lamun kabéh kritéria di luhur kacumponan.Upami teu kitu, hasilna teu valid.
Interprétasi Hasil
Hasil di handap ieu mungkin:
nilai Ct saluran FAM | nilai Ct saluran CY5 | Interprétasi | |
1# | Henteu aya Ct atanapi Ct> 40 | ≤40 | Virus Monkeypox négatip |
2# | ≤40 | Sakur hasilna | Virus Monkeypox positip |
3# | 40–45 | ≤40 | Uji ulang;lamun masih 40~45, laporkeun salaku 1# |
4# | Henteu aya Ct atanapi Ct> 40 | Henteu aya Ct atanapi Ct> 40 | Teu sah |
CATETAN: Lamun hasil teu valid lumangsung, sampel perlu dikumpulkeun sarta diuji deui.
Ngaran Produk | Ucing.No | Ukuran | Spésimén | Hirup Rak | Trans.& Sto.Temp. |
Monkeypox Virus Real Time PCR Kit | B001P-01 | 48 tés / kit | Sérum / Lesion Exudate | 12 Bulan | -25~-15 ℃ |